焦磷酸测序（Pyrosequencing）实验方法及技术

 

   先进的基于焦磷酸测序（Pyrosequencing）的PSQ96 MA技术平台，能提供基于序列测定的SNP检测、等位基因频率分析和甲基化检测服务。另外，还提供短片段的测序服务（50-100 bp），适用于细菌和病毒分型等研究领域。

   基于Pyrosequencing的SNP分析具有快速、高通量的特点，完成96个样品的SNP分析仅需10分钟。整个实验过程（包括PCR扩增、单链分离、Pyrosequencing测序和数据分析）也只需3-4 小时。
PSQ96 MA配备有功能强大的SNP分析软件，可支持SNP位点的复合检测（在一个反应体系中最多可同时检测3个不同位置的SNP位点）。对于混合样品，则可准确测定特定SNP位点的基因型频率。

一．常规 SNP 检测

1. 样品要求

       用户须提供足够量的基因组DNA样品，一般需200ng/样品/位点。 
二．基于 Pyrosequencing 技术的甲基化检测服务
1 ．甲基化研究意义
DNA甲基化是最早发现的基因表观修饰方式之一,可能存在于所有高等生物中。DNA甲基化能关闭某些基因的活性，去甲基化则诱导了基因的重新活化和表达。,真核生物中甲基化的主要形式是在DNA甲基化转移酶（DNMTs）的作用下，使CpG二核苷酸5'端的胞嘧啶转变为5'-甲基胞嘧啶。这种DNA修饰方式并没有改变基因序列，但是它参入了基因的表达调控。DNA甲基化在维持正常细胞功能、遗传印记、胚胎发育以及肿瘤发生过程中起着极其重要的作用。
2 ．基本流程：
通过亚硫酸氢盐处理基因组DNA，使其中未甲基化的C转变成T后，运用特异性引物扩增目的区段，然后用Pyrosequencing技术测定目标位点中C/T的比率，以此判断目标位点的甲基化程度。