TALEN 的组装构建

实验动物

最新修订时间：2022-02-10

简介

TALE 蛋白的特异 DNA 序列识别以及灵活的可组装性为它们在分子生物学中的应用提供了巨大的前景，针对任意序列的靶 DNA，科学家们可以设计组装任意的 TALE 单元结合目标 DNA 双螺旋序列。如果将 TALE 的 DNA 结合区域和其他功能性结构域构建成融合蛋白，则可以发挥更广泛的作用。

TALEN 的组装构建方法有磁珠载体 TALEN 组装构建法、TALEN 单元组装法构建法、TALEN 多等级连接法。

原理

磁珠载体 TALEN 组装构建法的原理是将 DNA 分子固定化到固相载体磁珠上面，利用固载体便于清洗底物、纯化产物的特性，进行连续的消化、连接等操作，逐步地将 RVD 单元串联一起。该方法实现了快速、高效大规模制备 TALE。

TALEN 单元组装构建法的构建原理是首先构建出识别 4 种碱基的 4 种单体质粒，然后利用同尾酶（isocandamer restriction enzyme）的特性循环往复地酶切-连接，进行质粒的构建，最终组装成识别目的靶 DNA 的 TALE 质粒。

TALEN 多等级连接法的原理是利用 Golden Gate 切-连反应生产环状化的六连子，再将成熟的 3 段六连子拼接并且构建到 TALEN 骨架当中，最后得到 TALEN 的表达质粒。所谓 Golden Gate 切-连反应，指的是通过使用 II 型限制性内切酶和高特异性的黏性末端连接酶在多次循环的步骤中消化掉错误的连接产物并且重新连接未连接的片段。

来源：丁香实验团队

操作方法

磁珠载体 TALEN 组装构建法

TALE 蛋白的特异 DNA 序列识别以及灵活的可组装性为它们在分子生物学中的应用提供了巨大的前景，针对任意序列的靶 DNA，科学家们可以设计组装任意的 TALE 单元结合目标 DNA 双螺旋序列。TALEN 靶点设计好后，需要组装 RVD 单元，构建 TALEN 质粒。

TALEN 单元组装法构建法

TALEN 多等级连接法