流式细胞术检测实验

实验分类：

实验动物

别名：

FACS

最新修订时间：2022-02-10

简介

流式细胞仪操作规则：光学系统（以 BD FACSCalibur 为例）

BD FACSCalibur 基本配有一支波长 488 nm 的氩离子激光：

FSC Diode 只收 488 nm 波长散射光

SSC PMT 只收 488 nm 波长散射光

FLIPMT 荧光光谱峰值落在绿色范围（波长 515～545 nm）

FL2PMT 荧光光谱峰值落在橙红色范围（波长 564～606 nm）

FL3PMT 荧光光谱峰值落在深红色范围（波长＞ 650 nm）

细胞样品准备要求：

1. 理想样品浓度调至（1～10）x 10 cells/mL，一般实验只需 0.5 mL 的样品。

2. 细胞样品务必放至 BDFALCON352052 试管中，否则无法上机。

3. 上机前务必去除样品中之细胞团块，以防管路堵塞，可使用附滤网 BDFALCON 试管(Cat.No.352235）或 35～55 mm 的尼龙筛网。

4. 供流式分析的样品是单细胞悬浮液，而且大部分样品都需经荧光染色。表面抗原荧光染色的方法大致有两种：直接免疫荧光和间接免疫荧光染色。

来源：丁香实验团队

操作方法

流式细胞术检测检测胎肝 Lin-c-Kit+Sca-1+细胞数

流式细胞术检测检测胎肝 Lin-c-Kit+Sca-1+细胞数的基本过程可分为如下几步：A 收集 E14.5 胎肝细胞，1 mL 注射器分离胎肝成单细胞悬液，并用细胞滤器过滤细胞悬液。B 胎肝总细胞数计数。C 2％ FBS/PBS 液洗一次。D 分别加入 c-Kit-APC（1:800），Sca-1-FITC（1:800），phycoerythrin-conjugated lineage mark

流式细胞术检测胎肝细胞凋亡

流式细胞术检测胎肝细胞凋亡的基本过程可分为如下几步：A 收集胎肝细胞，用 1 mL 注射器分离胎肝成单细胞悬液，并用细胞滤器过滤细胞悬液。B PBS 液洗一次，1000～2000 r/min 离心 5 分钟，弃上清，收集细胞。C 用 PBS 轻轻重悬细胞并计数。D 取 5 万～10 万重悬的细胞，1000～2000 r/min 离心 5 分钟，弃上清。E 加入 195 μL Annexin V-F