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流式细胞术检测检测胎肝 Lin-c-Kit+Sca-1+细胞数

相关实验:流式细胞术检测实验

最新修订时间:

材料与仪器

器材:


① 流式细胞仪管


② 手术器械


③ 1 mL 注射器


④ 流式细胞仪(BD FACSCalibur)。


试剂:

① e-Kit-APC

② Sca-1-FITC

③ phycoerythrin-conjugated lineage marker cocktail

④ containing CD3-PE

⑤ CD5-PE

⑥ B220-PE

⑦ Gr-1-PE

⑧ Ter119-PE(eBioscience)

⑨ 1x PBS

⑩ FBS。

步骤

流式细胞术检测检测胎肝 Lin-c-Kit+Sca-1+细胞数的基本过程可分为如下几步:


A 收集 E14.5 胎肝细胞,1 mL 注射器分离胎肝成单细胞悬液,并用细胞滤器过滤细胞悬液。


B 胎肝总细胞数计数。


C 2% FBS/PBS 液洗一次。


D 分别加入 c-Kit-APC(1:800),Sca-1-FITC(1:800),phycoerythrin-conjugated lineage marker cocklail(1:800),Ter119-PE(1:800)。


E 4 ℃ 孵育,30 分钟,避光。


F 加 500 mL 2% FBS/PBS 液,微振荡。


G 250 g 离心 5 分钟。


H PBS 液离心洗 2 遍,每次 5 分钟;流式细胞仪分析 Lin c-Kit'Sca-1'细胞数。结果示例如图8-8-3。


注意事项

1. 正式收取数据前要先用空白对照和单染的阴性对照,做好仪器的校正工作。

2. 上流式细胞仪的细胞液样本绝对不容许有组织残留,否则极易引起仪器内部管道堵塞。

来源:丁香实验

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