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过氧化物酶的测定实验

实验分类:

生物化学实验

最新修订时间:

简介

供体:氢过氧化物 氧化还原酶


供体 + H2O2 → 氧化型供体 + 2 H2O


从山葵中提取的这种酶是一种相对分子质量为 44000 的糖蛋白。它与过氧化氢酶关系密切,也携带一个原铁血红素作为辅酶。它对受体(H2O2)具有专一性,但是与众多的底物供体反应,这些特点都可以用在酶的实验中,如 5-氨基 2,3-羟基-1,4-邻苯二胺(发光氨)、3-氨基-9-乙基咔唑(AEC)、5-氨基水杨酸(5AS)、ABTS、4-氯-1-萘酚(4CIN)、3,3'-二氨基联苯氨(DAB)、愈创木酚、邻苯二氨(OPD)、抗坏血酸、间苯二酚、连苯三酚、3,3',5,5'-四甲基对二氨基联苯(TMB)。过氧化物酶应用在各种共价连接中,例如与 Western 印迹和酶联免疫测定(ELISA)中的抗体或细胞生物学中的胶状金(Basbaum,1989)。


来源:《酶学实验手册》

来源:丁香实验

操作方法

供体:ABTS

实验所需「试剂」具体见「其他」25℃ 时,在 414 nm 处,ε414=24.6×103 l/(mmol· mm)。必须注意,1 mol H2O2 形成 2 mol 氧化的 ABTS(Szutowicz 等,1984)。

供体:愈创木酚

实验所需「试剂」具体见「其他」0.97 ml 实验混合物0.02 ml 酶样品(用 0.1 mol/L 磷酸钾溶液 pH 7.0,稀释浓缩的原料溶液大约 2000 倍)开始加入 0.01 ml 0.1 mmol/L H2O2 溶液随后,25 ℃、436nm 处吸收值发生变化,ε436=25.5×103 l/(mol·cm)。(Makinen 和 Tenovon,1982)。

​供体:联二茴香胺

实验所需「试剂」具体见「其他」0.97 ml 实验混合物0.02 ml 酶样品开始加入 0.01 ml 0.1 mmol/L H2O2 溶液记录 25 ℃ 时、436nm 处吸收值发生变化,ε436=28.3×103 l/(mol·cm)。

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