过氧化物酶的测定实验

生物化学实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

供体：氢过氧化物氧化还原酶

供体 + H₂O₂ → 氧化型供体 + 2 H₂O

从山葵中提取的这种酶是一种相对分子质量为 44000 的糖蛋白。它与过氧化氢酶关系密切，也携带一个原铁血红素作为辅酶。它对受体（H₂O₂）具有专一性，但是与众多的底物供体反应，这些特点都可以用在酶的实验中，如 5-氨基 2，3-羟基-1，4-邻苯二胺（发光氨）、3-氨基-9-乙基咔唑（AEC）、5-氨基水杨酸（5AS）、ABTS、4-氯-1-萘酚（4CIN）、3，3'-二氨基联苯氨（DAB）、愈创木酚、邻苯二氨（OPD）、抗坏血酸、间苯二酚、连苯三酚、3，3'，5，5'-四甲基对二氨基联苯（TMB）。过氧化物酶应用在各种共价连接中，例如与 Western 印迹和酶联免疫测定（ELISA）中的抗体或细胞生物学中的胶状金（Basbaum，1989）。

来源：《酶学实验手册》

来源：丁香实验

操作方法

供体：ABTS

实验所需「试剂」具体见「其他」25℃ 时，在 414 nm 处，ε414＝24.6×103 l/（mmol· mm）。必须注意，1 mol H2O2 形成 2 mol 氧化的 ABTS（Szutowicz 等，1984）。

供体：愈创木酚

实验所需「试剂」具体见「其他」0.97 ml 实验混合物0.02 ml 酶样品（用 0.1 mol/L 磷酸钾溶液 pH 7.0，稀释浓缩的原料溶液大约 2000 倍）开始加入 0.01 ml 0.1 mmol/L H2O2 溶液随后，25 ℃、436nm 处吸收值发生变化，ε436＝25.5×103 l/（mol·cm）。（Makinen 和 Tenovon，1982）。

供体：联二茴香胺

实验所需「试剂」具体见「其他」0.97 ml 实验混合物0.02 ml 酶样品开始加入 0.01 ml 0.1 mmol/L H2O2 溶液记录 25 ℃ 时、436nm 处吸收值发生变化，ε436＝28.3×103 l/（mol·cm）。