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白细胞的多参数数据的采集和分析实验

实验分类:

免疫学实验

最新修订时间:

简介

现在已有几种软件包用于流式细胞仪数据分析。尽管每一个在处理数据时方法各异,但是基本策略是近似的。由于随着参数的增加,分析也变得愈加复杂,因此我们集中介绍一种经典的分析手段以及可以对各种流式细胞术参数通用的分析方法。

原理

白细胞的多参数数据的采集和分析实验的基本原理是参数所代表的是所要测量的内容,而通道描述的是测量的数值。共有 3 种参数: 前向散射(FSC)、侧向散射(SSC)和荧光。FSC 是测量从 2°到 22°范围的激光束(取决于设备制造商),并与所测量的粒子横切面积成比例。由于会有其他的因素影响到测量,因此仅是对粒子大小的评估。SSC 又叫垂直或 90°散射,是因为其在与激光束成 90°夹角进行测量, 并且对细胞的颗粒性等性状敏感,后者反映了与胞质成分不同的胞内颗粒的颗粒指数。荧光强度也是在与细胞流成 90。角度进行测量, 并且定量地记录所有在细胞染色过程中使用的可溶性荧光素。目前最常使用的荧光素是偶联在一抗、二抗上或偶联在亲和素上,并可以被 488nm 或大约 633nm 的波长激发。抗体可以被偶联上具有不同激发或发射光谱特性的荧光素。为了将不同颜色分离,需要使用滤光片和分色棱镜将不用特异波长反射或投射。由于荧光的发射波长范围较宽, 需要通过校正仪器的补偿电路或通过软件进行荧光补偿来去掉那些不要的重叠的荧光。所有的流式细胞仪均通过一种叫做列表模式的程序来收集数据。1 个标准的列表模式文件包括关于样品和仪器信息的标题,然后是按照顺序收集的数据。在列表模式文件里保存的数值是来自监测器的每一个参数经过电处理的电压值 (Pl ,P2,P3,. . . Pn)。如表 3-1 所示,列表模式文件里数据显示的是与每一个参数对应的通道,参数代表了对细胞 1、2、以此类推直到最后一个细胞 n 的测量值。如果对 10 000 个细胞测定 6 个参数,那么按照次序会有 60 000 个记录。

来源:丁香实验团队

操作方法

白细胞的多参数数据的采集和分析实验

现在已有几种软件包用于流式细胞仪数据分析。尽管每一个在处理数据时方法各异,但是基本策略是近似的。由于随着参数的增加,分析也变得愈加复杂,因此我们集中介绍一种经典的分析手段以及可以对各种流式细胞术参数通用的分析方法。

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