DNA 甲基化分析

DNA 甲基化分析的基本原理是DNA甲基化(DNA methylation)是指在甲基转移酶的催化下，DNA中的胞嘧啶被选择性地添加甲基，形成5'-甲基胞嘧啶常见于基因中的5'-CG-3'序列。

大多数脊椎动物基因组DNA都有少量的甲基化胞嘧啶，主要集中在基因5'-端的非编码区，并成簇存在。甲基化位点可随DNA的复制而遗传，因为在DNA复制后，甲基化酶可将新合成的未甲基化的位点进行甲基化。

根据实验方法不同，对应的原理也有所不同：

甲基化特异性 PCR的基本原理是将DNA经亚硫酸盐处理，非甲基化的胞嘧啶转变为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶保持不变。

在PCR反应时,设计两套不同的引物对：一对引物序列针对经亚硫酸盐处理后的甲基化DNA链设计,若用该对引物能扩增出片段，说明该检测位点发生了甲基化(M引物对）；另一对引物针对经亚硫酸盐处理后的非甲基化DNA链设计，若用该对引物能扩增出片段，说明该检测位点没有甲基化(U引物对)。图解示意如下17-6。

亚硫酸盐修饰后基因组测序的基本原理是DNA经亚硫酸盐处理，非甲基化的胞嘧啶转变为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶保持不变。

在PCR反应时，设计一对不含有CG位点的引物对，无论DNA序列本身经亚硫酸盐处理后是否发生改变，都能扩增得到相应片段。而后经过DNA测序获得目的片段的位点信息，图解示意如下17-7。