自然杀伤细胞的分离纯化

免疫学实验

别名：

NK 细胞

最新修订时间：2022-02-10

简介

NK 细胞属非特异性免疫细胞，是机体天然免疫系统的主要效应细胞，属于第三类淋巴细胞。NK 细胞可非特异性直接杀伤靶细胞，无需抗原预先致敏、抗体参与，且无 MHC 限制性。NK 细胞在抗肿瘤、抗感染和免疫调节中发挥重要功能。

NK 细胞功能研究首先涉及细胞的分离和纯化，该细胞多从人外周血以及小鼠脾脏单个核细胞中制备和分离，不同来源的 NK 细胞分离和纯化原理及过程相似。根据 NK 细胞的比重（1.052～1.077 g／mL ）、表型（CD56＃-CD16＋CD3-CD19-CD14-CD15）及生物学功能（无 MHC 限制性）等特点，已建立了多种分离 NK 细胞的方法，主要包括 Percoll 密度梯度分离法、补体裂解法、免疫磁珠或流式细胞术分选等方法。目前这些方法大多有相应的商品化试剂盒，分离及重复性较好，其中免疫磁珠及流式细胞术分选免疫细胞因其独特的分选效果，已得到越来越广泛的应用。采用何种 NK 细胞分离技术，应根据实验目的要求选择，但总的原则，应保证分离得到的细胞数量、纯度、活力能够达到实验要求，使用的分离方法尽可能简便、经济、易行。

原理

NK 细胞分离和纯化的基本原理是从人外周血以及小鼠脾脏单个核细胞中制备和分离，不同来源的 NK 细胞分离和纯化原理及过程相似。根据 NK 细胞的比重（1.052～1.077 g／mL ）、表型（CD56＃-CD16＋CD3-CD19-CD14-CD15）及生物学功能（无 MHC 限制性）等特点，已建立了多种分离 NK 细胞的方法，主要包括 Percoll 密度梯度分离法、补体裂解法、免疫磁珠或流式细胞术分选等方法。

应用

NK 细胞分离和纯化常用于细胞功能研究。

来源：丁香实验团队

操作方法

不连续密度梯度分离法

Percoll 是一种包有乙烯吡咯烷酮的硅胶颗粒，渗透压低（＜20 mOsmol／kgH20），黏度小，形成的梯度非常稳定，可高达 1.3 g／mL 密度。采用预先形成的密度梯度可在低离心力（200～1000 g）于数分至数十分钟内达到满意的细胞分离结果。由于 Percoll 扩散常数低，所形成的梯度十分稳定。而且 Percoll 不穿透生物膜，对细胞无毒害，因此广泛用于分离细胞、亚细胞成分、细菌

补体裂解法分离纯化自然杀伤细胞

NK 细胞功能研究首先涉及细胞的分离和纯化，该细胞多从人外周血以及小鼠脾脏单个核细胞中制备和分离，不同来源的 NK 细胞分离和纯化原理及过程相似。补体裂解法分离自然杀伤细胞主要根据 NK 细胞的比重（1.052～1.077 g／mL）、表型（CD56＃-CD16＋CD3-CD19-CD14-CD15）及生物学功能（无 MHC 限制性）等特点进行分离纯化。

磁性细胞分选器分离法分离纯化自然杀伤细胞

磁性细胞分选器分离（MACS）法即利用细胞表面标志，达到分离纯化 NK 细胞的目的。分离方式有阳性选择法和阴性选择法两种形式（具体操作参照实验时使用的试剂盒说明书）。