基于生物化学检测细胞凋亡

基于生物化学检测细胞凋亡的基本原理是：

①细胞凋亡的主要生物化学特征是其染色质断裂，染色质 DNA 在活化的核酸内切酶作用下，首先降解为 200～300kb 的片段。然后，DNA 片段在核小体单位之间连接处断裂，形成 180～200bp 整数倍的寡核苷酸片段。坏死细胞内的 DNA 则是被随机降解为任意长度的片段。因此，通过提取细胞 DNA 进行电泳，可以分析细胞是否发生凋亡或坏死；

②由于凋亡 DNA 双链断裂或是一条链上出现缺口，就会产生 3＇-OH 末端，而正常细胞以及正在增殖的细胞几乎没有 DNA 的断裂，所以没有 3＇-OH 末端形成。因此，在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（terminal deoxynucleotidyl transferase，TdT）的作用 下，将荧光素、地高辛或生物素等标记的脱氧三磷酸尿苷（deoxyuridinetriphate，dUTP）连接到凋亡细胞染色体 DNA 的 3＇-OH 末端，经激发光激发或酶联免疫反应等可以检测连接标记的脱氧一磷酸尿苷的多少，判断细胞的凋亡情况；

③细胞凋亡过程伴随许多特异性相关蛋白的降解及释放，如多聚（ADP-核糖）聚合酶 ［poly（ADP-ribose）polymerase，PRAP］ 降解、Caspase 酶原 的激活以及细胞色素 C 释放等，成为细胞凋亡的重要标志分子。因此，通过免疫印迹技术或酶动力学可检测这些蛋白的有无判断细胞凋亡。