免疫球蛋白 G( IgG ) 的纯化

硫酸铵沉淀可纯化小鼠抗体的所有亚类和其他种属抗体，本方案也可用于纯化任何种 属 的 IgM、 IgG 和 IgA。 材 料 腹水 或 MAb 上 清（单 元 1.4) VPBS 饱 和 硫 酸 铵（SAS) 硼 酸 盐 缓 冲 液（可选） 聚丙燏酰胺葡聚糖凝胶 S-200 Superfine (Pharmacia Biotech)

蛋 白 A 通 常 用 于 人（除 IgG3 夕 h 小 鼠 IgG1 结合力也较弱）、兔 、豚鼠和猪抗体的纯化。 材 料 腹 水 或 M Ab上 清（单 元 1. 4) PBS, pH8. O和pH7. 3 lmol/L NaOH 蛋 白 A 交联琼脂糖凝胶CL-4B (Pharmacia Biotech或 Sigma) 0.l

蛋 白 G 和蛋白A 在 不 同PH 下结合抗体的能力不同：蛋 白 G 在 低 pH 下与抗体结合力强，在 高 pH下与抗体结合力弱。但 一 些 抗 体（小 鼠 IgG1 和兔、人抗体）在 高 pH(8〜 1 0 ) 下仍与蛋白G 结合 。 一 般 推 荐 最 好 在 pH5 时结合抗体，在 PH2. 8 时洗脱抗体 。此法适用于小鼠IgG1、大 鼠 抗 体（多数亚类结合力弱而

一般情况下，单 克 隆 抗 体（尤其是大鼠源性）不能用 蛋 白A 或 蛋 白 G 交联琼脂糖凝胶层析纯化，在此情况下，可使用抗大鼠Ig 轻链单克隆抗体交联琼脂糖凝胶层析柱来结合组织培养上清或腹水中的大鼠单克隆抗体，然后用逐步降低洗脱液p H 的方法来确定从抗Ig柱上洗脱大鼠抗体的最温和洗脱条件。 附 加 材 料（其他材料见基本方案2) 小鼠抗大鼠/ c链 MAb