菌脂多糖的制备实验

实验分类：

免疫学实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

脂多糖是革兰氏阴性细菌细胞壁的组成成分，所以抗脂多糖抗体的制备可用革兰氏阴性细菌菌体抗原来制备，因此这里只介绍几种细菌脂多糖提取的方法。

来源：丁香实验

操作方法

热酚提取法

1. 细菌浓悬液用盐水经2500转/分，20分钟离心洗涤一次。 2. 将沉淀的菌混匀于蒸馏水中，放66℃水浴，然后滴加等量的90%热酚溶液（预热至66℃），边加边摇，而后在66℃水浴中搅拌25分钟 3. 在水浴中冷却，于4℃冰箱过夜 4. 以2000转/分离心15分钟 5. 将上层水溶液吸到另一试管中 6. 剩下的酚层及残渣组分可再加上述同量水在热水浴中

超声波处理法

1. 获得的菌液经2500转/分，20分钟离心洗涤1~2次，将沉淀配成2倍于湿菌浓度的浓菌液。 2. 用超声波发生器中频（约相当于12000 cps）处理20分钟。 3. 处理液经3000转/分，离心30分钟，吸取上清液即为脂多糖抗原。置4℃冰箱保存备用。

煮沸法

1. 将培养后得到的浓菌液沸水浴煮沸2小时。 2. 置冰箱静置两星期以上（使菌体残渣自由下沉）。 3. 3000转/分离心30分钟，取上清夜即为粗脂多糖抗原，置冰箱中保存备用。