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简介
来源:丁香实验
操作方法
1. 离子交换凝胶的选择依据: (1)根据蛋白质的pH只稳定范围。蛋白质在等电点pI以上pH稳定时选择阴离子交换凝胶介质,在pI以下pH的稳定时,则选用阳离子交换凝胶介质。 (2)根据特分离蛋白质的分子大小。分子量在10 000~100 000 0 Da 的蛋白,选用如DEAE-Sephacel和DEAE-Sepharose样凝胶;更大的分子,用Sephadex A-25或C-25。
🔥 离子交换层析实验(IEC)一、IEX 分离将 IEX 介质填充到柱中以形成填充床,然后用填充基质孔隙和颗粒之间空间的缓冲液平衡床。 二、平衡1、将固定相平衡到所需的起始条件:当达到平衡时,所有固定相带电基团都与可交换的反离子(例如Na+ 或 Cl-)结合。2、选择起始缓冲液的 pH 值和离子强度,以确保在上样时,介质与目标蛋白质结合,尽量避免与杂质结合。 三、上样和清洗1、结合目标分子:样品缓冲液应具有与起始缓冲液相同的