材料与仪器
蛋白质
离子交换缓冲液
离子交换层析柱 梯度混合器 电导表
离子交换缓冲液
离子交换层析柱 梯度混合器 电导表
步骤
1. 配制离子交换层析缓冲液，安装好层析柱，但以离子交换层析缓冲液取代其中的凝胶过滤缓冲液。
图一、用于蛋白质离子交换层析的梯度混合仪器
2. 用起始梯度的缓冲液溶解含蛋白质混合物的样品。
3. 弃去柱床上部的大部分缓冲液，并将样品加在凝胶的顶上。只要样品的离子强度不超过起始缓冲液的离子强度，上样体积不限。
4. 让样品流入凝胶柱床，并用缓冲液冲冼层析柱的内壁，用吸管往凝胶的顼上 加一层1 cm 高的缓冲液。
3. 弃去柱床上部的大部分缓冲液，并将样品加在凝胶的顶上。只要样品的离子强度不超过起始缓冲液的离子强度，上样体积不限。
4. 让样品流入凝胶柱床，并用缓冲液冲冼层析柱的内壁，用吸管往凝胶的顼上 加一层1 cm 高的缓冲液。
5. 连接梯度混合器，分部收集100个级分，每个组份相当于约1%总禅度体积。测各组分的A280以确定蛋白峰的所在，用电导表测离子强度以确定禅度的形状。
来源：丁香实验
