离子交换层析
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离子交换层析是最常用的分离纯化手段,下面提供离子交换层析条件摸索的自用protocal:
1. 除盐
将目标蛋白,或含目标蛋白溶液充分除盐,越低越好,只要蛋白仍稳定。同时,pH调节到上柱pH
2. 上柱
只要盐浓度低于上柱最高盐浓度,只管高流速上柱吧,不会漏出。
3. 梯度洗脱
最后使用AKTA,从B:0% 到B:100%进行梯度洗脱,梯度长度最好为柱体积的10倍以上。
4. 谱图分析
图中A为上柱的最高盐浓度(以电导表示),B为最低洗脱浓度
如何从电导推算盐浓度:
100%B为所提供的高盐溶液电导,0%B为无高盐时电导,按比例推算。
这样只要上柱前的样品电导低于A,就足可以上柱了。