双向电泳操作步骤

一、样品制备。1. 称重后将样品加入Dounch匀浆器。每100 mg 组织加入1.5——2.0 ml SDS/或尿素/溶解缓冲液，用B号研棒冲击50次，然后以A号研棒冲击50次。2. 放置几分钟后，取一小份样品于200 μl 离心管100 000 g 离心2 h 以上或在200 000 g 以上离心1 h。保留上清（蛋白样品）。加样于第1向凝胶上。二、第一向等电聚焦。1. 在干净的1.5 mm

1. 在干净的1.5 mm 内径的凝胶柱管上作好标记以指示应灌制凝胶柱的髙度。用橡皮筋将凝胶柱管捆绑成束，在一水平面上垂直竖起管束，从其顶部向下推压，使各柱管的底部平齐。 2. 用三、四层Parafilm膜小心封好2.5~3.0 cm 内径的凝胶灌制管的一端，使之形成一个结实的水密性的密封面。 3. 将凝胶柱管束放入凝校灌制管内，用环形支架和夹子将灌制管固定在垂直的位置，并使其密封端置于一水

1. 用垫片组装凝胶平板。夹层每边的垫片之上用夹子固定，并置于凝胶支架上。注意玻璃平板和垫片的平齐，收紧夹子以保证密封圈不发生泄漏。调整平板的水平和垂直，在平板间将放上凝胶识别标签，使之留在右下角。 2. 在一个真空瓶中分别加入30%丙烯酰胺/0.8%亚甲双丙烯酰胺，凝胶缓冲液和水，配制凝胶溶液。真空下脱气5 min。 3. 加入10%SDS和TEMED，摇匀；再加入10%过硫酸铵，摇匀。

1. 称重后将样品加入Dounch匀浆器。每100 mg 组织加入1.5~2.0 ml SDS/或尿素/溶解缓冲液，用B号研棒冲击50次，然后以A号研棒冲击50次。 2. 放置几分钟后，取一小份样品于200 ul 离心管100 000 g 离心2 h 以上或在200 000 g 以上离心1 h。保留上清（蛋白样品）。加样于第1向凝胶上。