第二向凝胶

1.  用垫片组装凝胶平板。夹层每边的垫片之上用夹子固定，并置于凝胶支架上。注意玻璃平板和垫片的平齐，收紧夹子以保证密封圈不发生泄漏。调整平板的水平和垂直，在平板间将放上凝胶识别标签，使之留在右下角。

2.  在一个真空瓶中分别加入30%丙烯酰胺/0.8%亚甲双丙烯酰胺，凝胶缓冲液和水，配制凝胶溶液。真空下脱气5 min。

3.  加入10%SDS和TEMED，摇匀；再加入10%过硫酸铵，摇匀。

4.  加入溶液于凝胶夹层中，加至离短的玻璃平板顶部5 mm 处，上面加一层水饱和异丁 醇或水，使凝胶聚合1.5 h。

 

5.  入平衡缓冲液完全覆盖第1向凝胶。

 

6.  将凝胶连同平衡缓冲液一起倒于一个置于一烧杯之上的尼龙网筛上，然后将凝胶移于一 5 cm x 15 cm 的玻璃平板上，用小铲将凝胶沿凝胶夹层的一边放好。

7.  用吸管往将要加样的平板凝胶的顶部加一很薄的热的0.5%琼脂糖。

8.  用小铲小心地将第1向凝胶滑到玻璃平板并横跨于平扳凝胶的顶部，第1向凝胶蓝染的一端靠右。

 

9.  往第1向凝胶上加一层热的0.5%琼脂糖，让琼脂糖固化并将凝胶固定。

10.  将凝胶夹层安置于电泳槽中。往上、下槽加入预冷的电泳缓冲液。

 

11.  用管子将冷却剂的入口和出口连好，开始让冷却剂流动，使电泳槽中缓冲液的温度保持在10~20℃，保证电泳过程中凝胶得到充分的冷却。

12.  用导线将电泳室与电猓连接，每片凝胶在15~20 mA的电流下电泳至指示染料到达凝胶的底部。

13.  在电泳结束时将电压调至零位，关闭电源。从电泳单元中取出凝胶夹层，并取走夹子。 用小铲将玻璃平板橇起。

 

14.  凝胶染色或进行免疫印迹或放射自显影。