细菌 RNA 制备实验

实验分类：

RNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

来源于任何细胞的RNA都可以通过反转录酶的作用拷贝成双链DNA并克隆化，获得相应的于特定细胞来源的cDNA文库。

来源：丁香实验

操作方法

革兰氏阴性细菌中提取

1. 培养100 ml 大肠杆菌或500 ml 蓝细菌至对数生长期，加入1/20体积终止缓冲液，置于冰上。 2. 于4℃用JA-10转子17 700 g 离心5 min 收集细胞。 3. 用2 ml STET裂解液重悬细胞，加入100 μl 0.2 mol/l 的VRC，移入15 ml 聚丙烯管子。 4. 加入1 ml 缓冲液平衡酚，振荡1 min 再加1 ml 氯仿，振荡1

革兰氏阳性细菌中提取

1. 于4℃ 12 000 g 离心从10 ml 细菌培养物回收细胞。 2. 重悬菌体于0.5 ml 裂解缓冲液，并移入微量离心管中，在干冰中冻结。 3. 解冻并用微探头超声发生器以30W超声3次，每次10 s （避免起泡），37℃温育60 min。 4. 加入等体积的酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）抽提，于室温微量离心机高速离心5 min，上层水相移入另一干净微量离心管中