细菌提RNA，需要培养到什么时期最好？

1.最好新鲜组织，这样RNA提取的效果比较好，这是肯定的。

2. 如果不是新鲜的（最好在半年之内，-80℃或者液氮中冻存的）组织，注意不要反复冻融，从冰冻状态拿到0-4℃，注意不要拿到常温，待组织解冻后，用 DEPC泡过的剪刀剪一小块组织，称重后，放到预冷的匀浆器中，然后加入一定量的TRIZOL试剂，然后匀浆。

注意：速度不要太快，要匀一会挺一会，否则由于摩擦产热，RNA遇热会加速降解。如果一次做多个标本的RNA提取，也要这样做，更不能急。

1. 验证敲除和过表达效率的话，在对数生长期的中期;
2. 如果敲除的基因影响细菌生长的话，建议与未敲除菌培养时间一致，在未敲除菌的对数生长后期一起取样，后续先将菌落浓度稀释为一致后提取RNA。
3. 题目建议加上"效率"，否则会以为是问"验证构建的敲除和过表达菌株是否正确"，这样答案就是菌落PCR和测序了。

对数生长期，OD值0.6左右即可

对数生长期最好，OD600大约在0.5左右