材料与仪器
RNA
酚 氯仿 异戊醇 NaCl 乙醇 TE
离心机 分光光度计 摇床
酚 氯仿 异戊醇 NaCl 乙醇 TE
离心机 分光光度计 摇床
步骤
1. 于4℃ 12 000 g 离心从10 ml 细菌培养物回收细胞。
2. 重悬菌体于0.5 ml 裂解缓冲液，并移入微量离心管中，在干冰中冻结。
3. 解冻并用微探头超声发生器以30W超声3次，每次10 s （避免起泡），37℃温育60 min。
4. 加入等体积的酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）抽提，于室温微量离心机高速离心5 min，上层水相移入另一干净微量离心管中。
5. 用酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）再抽提1次，再用氯仿/异戊醇（24：1）抽提1次。
6. 400 μl 水相加入15 μl 5mol/l NaCl，并加满冰冷的无水乙醇，混匀并于冰上放置15~30 min，或于-20℃过夜。
7. 于4℃微量离心机离心15 min，沉淀用冰冷的70%乙醇冲洗，晾干。
8. 用95 μl DNA酶消化缓冲液溶解沉淀，加4 μl 2.5 mg/ml 无RNA酶的DNA酶Ⅰ，37℃温育60 min。
2. 重悬菌体于0.5 ml 裂解缓冲液，并移入微量离心管中，在干冰中冻结。
3. 解冻并用微探头超声发生器以30W超声3次，每次10 s （避免起泡），37℃温育60 min。
4. 加入等体积的酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）抽提，于室温微量离心机高速离心5 min，上层水相移入另一干净微量离心管中。
5. 用酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）再抽提1次，再用氯仿/异戊醇（24：1）抽提1次。
6. 400 μl 水相加入15 μl 5mol/l NaCl，并加满冰冷的无水乙醇，混匀并于冰上放置15~30 min，或于-20℃过夜。
7. 于4℃微量离心机离心15 min，沉淀用冰冷的70%乙醇冲洗，晾干。
8. 用95 μl DNA酶消化缓冲液溶解沉淀，加4 μl 2.5 mg/ml 无RNA酶的DNA酶Ⅰ，37℃温育60 min。
9. 用酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）抽提1次，移出水相，有机相加入100 μl 缓冲液，混匀，于室温微量离心机高速离心5 min，合并两次的水相。
10. 用氯仿/异戊酵（24：1）抽提1次，加入10 μl 5mol/l NaCl和600 μl 无水乙醇，在-20℃过夜或置于干冰/乙醇中15 min。
11. 用微量离心机于4℃下高速离心15~30 min。
12. 用500 μl 70%乙醇洗涤沉淀，晾干，溶解于100 μl DEPC处理过的水。
13. 取10 μl 稀释于1 ml 水，测A280和A260以定量，保存于-70℃或以乙醇沉淀的形式保存。
10. 用氯仿/异戊酵（24：1）抽提1次，加入10 μl 5mol/l NaCl和600 μl 无水乙醇，在-20℃过夜或置于干冰/乙醇中15 min。
11. 用微量离心机于4℃下高速离心15~30 min。
12. 用500 μl 70%乙醇洗涤沉淀，晾干，溶解于100 μl DEPC处理过的水。
13. 取10 μl 稀释于1 ml 水，测A280和A260以定量，保存于-70℃或以乙醇沉淀的形式保存。
来源：丁香实验
