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简介
序列特异性引物 PCR,英文名是 sequence specific primer, PCR-SSP,是基于核酸序列识别的方法。PCR-SSP 方法是设计出一整套等位基因组特异性引物,借助 PCR 技术获得 HLA 型别特异的扩增产物,通过电泳直接分析带型决定 HLA 型别,从而大大简化了实验步骤。优点是简单易行,分辨率可从低到高,成本低。缺点是不易自动化,不能检测新的等位基因,试剂盒需不断升级,合成多对 HLA 等位基因特异性的引物一次性投资较大。此方法适宜零散和纯度低样本,重复实验时要重提 DNA 和必须使用紫外凝胶成像仪保留原始资料。
目前,用于序列特异性引物 PCR 的方法主要有 1 种:序列特异性引物 PCR。
原理
序列特异性引物 PCR 的基本原理:
PCR-SSP 分型方法使用的特异性引物与模版 DNA 完全互补,而且使用的 Taq 任聚合酶没有核酸外切酶的活性,因此不像通常 PCR 扩增时允许 3' 末端可以有一个或几个碱基错配,即使特异性引物发生非特异性退火,也不至于发生非特异性扩增。该方法是利用与 HLA 等位基因序列互 补的引物,对待测样本 DNA 进行特异性 PCR 扩增。由于每对特异性引物所鉴定的是顺式排列的 HLA 等位基因序列,所以该方法的分辨率高,而且容易鉴定出杂合子。特异性 PCR 扩增产物很容易用琼脂糖凝胶电泳检测,根据特异性 PCR 扩增产物的出现与否,对待测样本的 HLA 等位基因型别进行判断。
应用
序列特异性引物 PCR 的常用应用领域如下:
(一)HLA 基因分型的基因诊断
(二)点突变遗传病等的基因诊断
来源:丁香实验团队
操作方法
序列特异性引物 PCR,英文名是 sequence specific primer, PCR-SSP,借助 PCR 技术获得 HLA 型别特异的扩增产物,可通过电泳直接分析带型决定 HLA 型别,从而大大简化了实验步骤,具有简单易行的优点,分辨率可从低到高,成本低,在 HLA 分型中得到了广泛应用。
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