序列特异性引物 PCR

PCR 技术

别名：

sequence specific primer，PCR－SSP3

最新修订时间：2022-02-10

简介

序列特异性引物 PCR，英文名是 sequence specific primer， PCR－SSP，是基于核酸序列识别的方法。PCR－SSP 方法是设计出一整套等位基因组特异性引物，借助 PCR 技术获得 HLA 型别特异的扩增产物，通过电泳直接分析带型决定 HLA 型别，从而大大简化了实验步骤。优点是简单易行，分辨率可从低到高，成本低。缺点是不易自动化，不能检测新的等位基因，试剂盒需不断升级，合成多对 HLA 等位基因特异性的引物一次性投资较大。此方法适宜零散和纯度低样本，重复实验时要重提 DNA 和必须使用紫外凝胶成像仪保留原始资料。

目前，用于序列特异性引物 PCR 的方法主要有 1 种：序列特异性引物 PCR。

原理

序列特异性引物 PCR 的基本原理：

PCR－SSP 分型方法使用的特异性引物与模版 DNA 完全互补，而且使用的 Taq 任聚合酶没有核酸外切酶的活性，因此不像通常 PCR 扩增时允许 3' 末端可以有一个或几个碱基错配，即使特异性引物发生非特异性退火，也不至于发生非特异性扩增。该方法是利用与 HLA 等位基因序列互补的引物，对待测样本 DNA 进行特异性 PCR 扩增。由于每对特异性引物所鉴定的是顺式排列的 HLA 等位基因序列，所以该方法的分辨率高，而且容易鉴定出杂合子。特异性 PCR 扩增产物很容易用琼脂糖凝胶电泳检测，根据特异性 PCR 扩增产物的出现与否，对待测样本的 HLA 等位基因型别进行判断。

应用

序列特异性引物 PCR 的常用应用领域如下：

（一）HLA 基因分型的基因诊断

（二）点突变遗传病等的基因诊断

来源：丁香实验团队

操作方法

序列特异性引物 PCR

序列特异性引物 PCR，英文名是 sequence specific primer， PCR－SSP，借助 PCR 技术获得 HLA 型别特异的扩增产物，可通过电泳直接分析带型决定 HLA 型别，从而大大简化了实验步骤，具有简单易行的优点，分辨率可从低到高，成本低，在 HLA 分型中得到了广泛应用。