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引物延伸实验

实验分类:

PCR 技术

最新修订时间:

简介

引物延伸分析用于确定位置和定量特定RNA的5'-端的数量。结束标记的寡核苷酸杂交,RNA和利用中存在的脱氧核苷酸逆转录作为底漆。因此RNA的反转录成cDNA,变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析。cDNA的长度反映了基地之间的标记引物和RNA的5'-端核苷酸的数量,基因产品的数量是针对性的RNA的量成正比。

来源:丁香实验

操作方法

引物延伸实验

1. 依次加入下列试剂,建立用以标记引物的反应混合液(终体积10 μl) (1)2.5 μl H2O (2)1 μl 10×T4多核苷酸激酶缓冲液 (3)1 μl 0.1 mol/l DTT (4)1 μl 1 mol/l 亚精胺 (5)1 μl 50~100 ng/μl 挂核苷酸引物 (6)3 μl 10 μCi/μl[γ-32P]ATP (7)0.5

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