DNA 片段探针的应用实验

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

所谓探针，一般是指用来检测某一特定核苷酸序列或基因序列的DNA片段或RNA片段。但要使探针DNA片段能实际应用，必须使DNA或RNA分子带上可识别的信号标志，以便跟踪观察探针与其同源的核苷酸序列发生杂交反应的位置，被探测DNA或RNA片段上的大小、杂交信号的强弱等。目前应用最多的是核素标记方法或非核素标记方法。

来源：丁香实验

操作方法

甲酰胺法

1. 用5~20 ml 杂交液Ⅰ依次浸泡10~20张硝酸纤维素滤膜。滤膜装入杂交袋中，加入足够的杂交液，密封后42℃预杂交1 h。 2. 往带螺盖的试管中，加入放射性探针和2 mg 超声波处理的鲱鱼精DNA，煮沸10 min。 3. 探针混合液移至冰浴，加入2 ml 杂交液Ⅰ 。 4. 用带18-G针头的注射器将探针混合液加入到杂交袋中滤膜上，重新密封后于42℃温育过夜。

水溶液中杂交

1. 除了于65℃在杂交液Ⅰ中温育的条件外，预杂交按甲酰胺法进行。 2. 按甲酰胺法制备探针并用2 ml 杂交液Ⅰ稀释。 3. 滤膜在65℃杂交过夜，然后移去杂交液，用低严紧性洗膜液Ⅰ洗膜2次。 4. 用高严紧性洗膜液Ⅰ在65℃迅速洗膜5~8次。 5. 最后一次洗膜延时到20 min，洗涤后的滤膜的非特异性信号达到仅比背景高几倍的水平。