材料与仪器
DNA
杂交液 洗膜液
培养箱
杂交液 洗膜液
培养箱
步骤
1. 除了于65℃在杂交液Ⅰ中温育的条件外,预杂交按甲酰胺法进行。
2. 按甲酰胺法制备探针并用2 ml 杂交液Ⅰ稀释。
3. 滤膜在65℃杂交过夜,然后移去杂交液,用低严紧性洗膜液Ⅰ洗膜2次。
4. 用高严紧性洗膜液Ⅰ在65℃迅速洗膜5~8次。
5. 最后一次洗膜延时到20 min,洗涤后的滤膜的非特异性信号达到仅比背景高几倍的水平。
3. 滤膜在65℃杂交过夜,然后移去杂交液,用低严紧性洗膜液Ⅰ洗膜2次。
4. 用高严紧性洗膜液Ⅰ在65℃迅速洗膜5~8次。
5. 最后一次洗膜延时到20 min,洗涤后的滤膜的非特异性信号达到仅比背景高几倍的水平。
来源:丁香实验