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甲酰胺法

相关实验:DNA 片段探针的应用实验

最新修订时间:

材料与仪器

DNA
杂交液 洗膜液
注射器 超声仪 水浴锅

步骤

1.  用5~20 ml 杂交液Ⅰ依次浸泡10~20张硝酸纤维素滤膜。滤膜装入杂交袋中,加入足够的杂交液,密封后42℃预杂交1 h。
 
2.  往带螺盖的试管中,加入放射性探针和2 mg 超声波处理的鲱鱼精DNA,煮沸10 min。

3.  探针混合液移至冰浴,加入2 ml 杂交液Ⅰ 。

4.  用带18-G针头的注射器将探针混合液加入到杂交袋中滤膜上,重新密封后于42℃温育过夜。

5.  用约500 ml 低严紧性洗膜液Ⅰ于室温洗涤滤膜3次,每次10~15 min。
 
6.  再用约500 ml 高严紧性杂交液Ⅰ(预热到洗涤温度)洗涤滤膜2次,每次15~20 min。

7.  用塑料保鲜膜将湿润的滤膜包裹好,或让它贴在一塑料板上干燥后进行放射自显影。

来源:丁香实验

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