材料与仪器
DNA
杂交液 洗膜液
注射器 超声仪 水浴锅
杂交液 洗膜液
注射器 超声仪 水浴锅
步骤
1. 用5~20 ml 杂交液Ⅰ依次浸泡10~20张硝酸纤维素滤膜。滤膜装入杂交袋中,加入足够的杂交液,密封后42℃预杂交1 h。
2. 往带螺盖的试管中,加入放射性探针和2 mg 超声波处理的鲱鱼精DNA,煮沸10 min。
3. 探针混合液移至冰浴,加入2 ml 杂交液Ⅰ 。
4. 用带18-G针头的注射器将探针混合液加入到杂交袋中滤膜上,重新密封后于42℃温育过夜。
5. 用约500 ml 低严紧性洗膜液Ⅰ于室温洗涤滤膜3次,每次10~15 min。
3. 探针混合液移至冰浴,加入2 ml 杂交液Ⅰ 。
4. 用带18-G针头的注射器将探针混合液加入到杂交袋中滤膜上,重新密封后于42℃温育过夜。
5. 用约500 ml 低严紧性洗膜液Ⅰ于室温洗涤滤膜3次,每次10~15 min。
6. 再用约500 ml 高严紧性杂交液Ⅰ(预热到洗涤温度)洗涤滤膜2次,每次15~20 min。
7. 用塑料保鲜膜将湿润的滤膜包裹好,或让它贴在一塑料板上干燥后进行放射自显影。
来源:丁香实验