生物素酰化探针的制备实验

1. 混合以下物质于100 μl 反应体积： （1）10 μl 10×大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ缓冲液 （2）10 μl 0.5 mmol/l 3dNTP混合液 （3）10 μl 0.5 mmol/l 生物素-11-dNTP贮存液 （4）10 μl 0.5 mmol/l 2-ME （5）2 μg DNA （6）20 U 大肠杆菌聚合酶Ⅰ （7）DNA酶Ⅰ

1. 在1. 5 ml 离心管中加入500 ng~2 μg 模板DNA，加水至总体积为34 μl。 2. 在沸水中变性DNA 5 min 置于冰浴5 min，稍加旋离。 3. 按顺序加入下列溶液： （1）10 μl 生物素酰化随即多聚体 （2）5 μl dNTP/生物素混合物 （3）1 μl klenow酶（5U） （4）37℃温育1 h。 4.