材料与仪器
DNA
dNTP 生物素 klenow酶 TE EDTA LiCl 乙醇
离心机 培养箱
dNTP 生物素 klenow酶 TE EDTA LiCl 乙醇
离心机 培养箱
步骤
1. 在1. 5 ml 离心管中加入500 ng~2 μg 模板DNA，加水至总体积为34 μl。
2. 在沸水中变性DNA 5 min 置于冰浴5 min，稍加旋离。
3. 按顺序加入下列溶液：
2. 在沸水中变性DNA 5 min 置于冰浴5 min，稍加旋离。
3. 按顺序加入下列溶液：
（1）10 μl 生物素酰化随即多聚体
（2）5 μl dNTP/生物素混合物
（3）1 μl klenow酶（5U）
（4）37℃温育1 h。
4. 加入3 μl 0.5 mol/l EDTA pH8.0以终止反应。加入5 μl 4 mol/l LiCl和150 μl 冰冷的无水乙醇，置于冰浴30 min。
5. 室温高速离心10 min，沉淀用70%乙醇洗涤。
5. 室温高速离心10 min，沉淀用70%乙醇洗涤。
6. DNA用20 μl pH7.5的TE缓冲液重悬。用比色法或化学发光法估价生物素酰化反应的效果。
来源：丁香实验
