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DNA 印迹杂交分析实验

实验分类:

DNA 实验

最新修订时间:

简介

杂交分析的原理是特定序列的单链DNA分子(即通常标记的“探计”)可与另一个固定了的具有互补序列(“靶”序列)的DNA分子或RNA分子形成碱基配对,杂交分子的稳定性取决于发生碱基配对的程度,这一技术可检测复杂基因组中的单拷贝基因。

来源:丁香实验

操作方法

放射标记法

1. 用6×SSC润湿带有固定了的DNA的膜。 2. 将膜的DNA面朝上置于杂交管中,ATP溶液的加入量为约1 ml/cm2膜,在68℃杂交炉中滚动3 h。 3. 在预杂交即将结束时,于100℃将DNA探针变性10 min,置于冰中。 4. 将杂交管中的APH溶液倒掉,换上等体积的预热的APH溶液(68℃),加入变性探针,68℃滚动下杂交过夜。 5. 倒掉A

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