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放射标记法

相关实验:DNA 印迹杂交分析实验

最新修订时间:

原理

本方案适合于用100~1 000 bp 长的放射性标记的DNA探针对Southern转印、斑点及狭线印迹进行杂交分析。
 

材料与仪器

DNA
SDS SSC
水浴锅 培养箱

步骤

1.  用6×SSC润湿带有固定了的DNA的膜。
 
2.  将膜的DNA面朝上置于杂交管中,ATP溶液的加入量为约1 ml/cm膜,在68℃杂交炉中滚动3 h。
 
3.  在预杂交即将结束时,于100℃将DNA探针变性10 min,置于冰中。

4.  将杂交管中的APH溶液倒掉,换上等体积的预热的APH溶液(68℃),加入变性探针,68℃滚动下杂交过夜。
 
5.  倒掉APH液,加入等体积的2×SSC/0.1%SDS,室温下滚动温育10 min。5 min后更换洗膜液。
 
6.  用等体枳的0.2×SSC/0.1%SDS替换上述洗膜液,室温下滚动温育10 min 后更换洗膜液

7.  如果需要,在42℃,0.2×SSC/0.1%SDS进行15 min 中等严紧度的洗膜2次。

8.  如果需要,在68℃,0.1×SSC/0.1%SDS进行15 min 高等严紧度的洗膜2次。

9.  倒掉最后的洗膜液,在室温下用2×SSC漂洗膜,并吸干多余的液体,用塑料膜包裹后放射自显影。

来源:丁香实验

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