上真正的困难还是在于基因的外源表达和功能/活性等后续检测。 所以，建议你先做基因表达检测，然后选择性的再做基因克隆表达。 阳光海岛 基因的差异表达分两步，一是通过mRNA的变化来考察基因转录的改变，这部分用RealTimePCR或者SSH可以做到，第二是检查，蛋白表达量的变化来考察蛋白翻译的改变，这部分可用2D加细胞ELISA来做。 有两种思路，一种即楼上提及的将80个基因分别进行定量PCR，以得到这80个基因的差异

，就是不知道怎么做，我以为是一个标本，在不同的反应板里做 3 次，取平均结果，同一个实验室里也没人做过的，后来问同学，才知道，在这里谢谢她了。 过程如下：20ul 体系，比如说你要做 10 个标本，每个标本要做 3 个复孔，就先准备 10*3+大约 5 个标本的母液（含酶、realtimepcr 的试剂等，但不包括模板），然后准备 10 个 500ul 的 pcr 管，每个分装 60ul。然后在分装好的母液中加入 3ul 的模版，混匀后再分装 20ul 到 3 个 realtime 反应孔中

，就是不知道怎么做，我以为是一个标本，在不同的反应板里做3次，取平均结果，同一个实验室里也没人做过的，后来问同学，才知道，在这里谢谢她了。过程如下：20ul体系，比如说你要做10个标本，每个标本要做3个复孔，就先准备10*3+大约5个标本的母液（含酶、realtimepcr的试剂等，但不包括模板），然后准备10个500ul的pcr管，每个分装60ul。然后在分装好的母液中加入3ul的模版，混匀后再分装20ul到3个realtime反应孔中，这样就说传说的3个复孔了，避免了不同批次、加样等等误差。注

了吧，呵呵，继续 但是一般realtimePCR跑下来，cycle数在35左右就认为是阴性结果了，这样的结果应该不能用的吧？不知有什么方法可以让cycle数提前一点的~~ 赵东生 增加模板浓度应该会让Ct提前吧！ 本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴 师兄微信号：shixiongcoming

了一个典型的小RNA调控的基因。 另外，现在的RealtimePCR检测可以验证小样本的mRNA水平的变化。 Fasta921 cmukiki wrote: 我想测某基因在某种肿瘤中的表达情况，但由于标本的限制，只能从蛋白水平检测了。如果蛋白水平存在高表达，我能证明该基因就是高表达吗？请大家答疑！非常感谢！ 蛋白质作为基因功能的执行者。 基因是否高表达一般以蛋白

的。 相关实验： （1）端粒酶活性检测 PCR-ELISA 端粒酶检测法 细胞周期的测定 （2）mRNA 表达水平的检测 实时荧光定量 PCR（realtimePCR） 8. 2008 年，德国科学家哈拉尔德·楚尔·豪森及法国科学家弗朗索瓦丝·巴尔-西诺西和吕克·蒙塔尼。豪森发现了人乳头状瘤病毒 (HPV)，这种病毒是导致宫颈癌的罪魁祸首。巴尔-西诺西和蒙塔尼的获奖成就则是发现

产物电泳 如何才能把文库中的大片段调出来? 相对定量RealtimePCR结果分析 帮查找大鼠GLUT-1、GLUT-3基因序列 引物有问题 求：大鼠细胞色素氧化酶基因全序列 相对定量可以将反转录的cDNA模板梯度稀释做标准曲线吗？ 哪里能买到手提式紫外切胶仪 外周血的总RNA怎么提取 克隆鸡CD4分子好的特异性引物? RNA的提取? PGEX-3X质粒酶切位点酶切分析 如何查到兔子的HMG CoA还原酶的基因 禾本科植物做RT-PCR时多选择什么样的持家基因作内参照 单侧PCR OR 锚式

呵呵，希望各位高手多多参与，及时帮助广大战友解决问题哈！ 质粒做realtimepcr用的标线的几个问题 普通的RT-PCR所用的引物能采用文献中Real Time PCR的引物吗 关于位点特异性引物设计 无脊椎动物的内参照用什么 豚鼠RT-PCR内参是什么 请教PCR问题 关于内参的问题/G+的链球菌（原核）的内参是什么 长PCR分段扩增后的酶切连接问题,PCR带消失了 测序结果信号差的原因 扩增支原体16srRNA基因如何设置内参照 用石膏蜡块组织标本如何做

=1&tpg=29&age=0 引物二聚体怎么办呢？ http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=4053819&sty=1&tpg=28&age=0 求助！有没有介绍realtimepcr引物设计的资料？ http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=4054133&sty=1&tpg=28&age=0 求助ALU_PCR的引物 http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id

at roomtemperature (see Note 5 ). 4. Read total luminescence. 5. Express data as a ratio of Firefly relative light units to Renillarelative light units. 4. Notes 1. Two common Wnt target genes are axin2 and lef1. RealtimePCR primers