求助|研一新手小白做石蜡切片的免疫荧光步骤，请各位师哥师姐帮忙看看！！！

1. 抗荧光淬灭液的选择：在选择抗荧光淬灭液时，了解您的目的抗原是否在细胞核内或胞外是很重要的。如果目的抗原在细胞核内，可以考虑选择带有DAPI的抗荧光淬灭液，以便进行细胞核染色。如果目的抗原在胞外，则可以选择不带DAPI的抗荧光淬灭液。

2. DAPI染色和透明化处理：如果您选择使用带有DAPI的抗荧光淬灭液进行细胞核染色，通常不需要额外的透明化处理。DAPI染色可以直接在孵育切片前进行。

3. 同时孵育两种一抗：可以同时孵育两种一抗，但需要确保两种一抗不会发生交叉反应。为了避免交叉反应，您可以选择使用不同的二抗荧光偶联（如驴抗山羊和驴抗兔），以便在荧光显像中区分两种一抗。

4. 一抗的稀释：对于不同品牌的一抗，最好按照各自的推荐终浓度进行稀释。您可以在同一封闭液中使用不同一抗的适当稀释倍数，以确保每种一抗的最佳效果。

是的，需要先看目的蛋白在不在细胞内，再考虑淬灭，如果目的蛋白在细胞外，则需要淬灭，淬灭前先通透，保证淬灭效果

dapi需要孵育前做通透处理，然后再进行dapi