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有没有提过植物蛋白的大神,请教WB

相关实验:利用植物蛋白质芯片研究蛋白磷酸化实验

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实验小助理静静

植物蛋白,转基因带GFP标签的,没有可用的阳性对照,所以孩子不知道是没有提出来蛋白还是抗体没有选好,有没有提过植物蛋白的大神,看看孩子的裂解液

tris 8.0 20mM , Nacl 150mM , SDS 1%, NP40 1%,EDTA 1mM,PMSF 1mM, 蛋白尿抑制剂。 1g样品加3ml裂解液,超声开3关7,5分钟。

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3 个回答

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Eason老歌迷

有帮助

你要是怕植物蛋白没提出来,你可以做一个bca测一下浓度,还可以通过转完膜封闭了你用丽春红染一下,看看有没有条带不就行了。

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dxy_gwrp7ndq

有帮助

裂解液没啥问题。你可以先跑一个植物内参看看是不是蛋白没提出来。

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府宅

有帮助

这个实验的影响因素比较多。

1.转进去了没有,做阳性对照了吗

2.表达了没有,有没有空载的wb图片?如果空载GFP显色,说明转染没有问题,抗体也没有问题,裂解液也没有没问题。当然你的裂解液应该没有问题。

3.wb的图片,内参有带吗?如有,说明裂解液没有问题。

4.GFP作为常用标签,抗体一般不会有问题,这个常用,找旁边课题组的做个验证就行了。

5.如果能确定2,表达序列也没有移码和突变,不表达的话,就是这个蛋白,对细胞有毒性了。

如果有空载做对照,这个问题就好分析了。

做验证可以先易后难的就行。

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