蛋白的上样量要怎样根据实验的要求来确定？

一般你跑wb的话，40ug/ul就足够了，如果你要跑考染的，也可以用40ul的，但是银染，你只需要用1/6的量就可以了。

Western Blot一般上样30－100微克不等，结果跟目的蛋白的丰度、上样量、一二抗的量和孵育时间都有关系，也与显色时间长短有关。开始摸条件时，为了拿到阳性结果，各个步骤都可以量多一点时间长一点，当然背景也就出来了。要拿到好的结果，如果抗体好的话比较容易，抗体不好的话就需要反复地试了，当然有的不适合Western Blot的怎样做也不行。

上样量要根据实验的要求来定， 如果要求是定量和半定量的Western Blot 则上样量要均等，如果只是要定性，则没有太大的关系， 尽量多上就行了， 但是不要超载。