秋秋欣欣
正常细胞传代的操作到六孔板等着贴壁就行
静心观照
正常传代就行了。
胰酶消化,收集,离心,重悬。重悬后计数,根据所需的细胞密度接种至6孔板就可以了。
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我们现在培养的细胞加入胰酶后很容易脱壁,因此我们一般的就加用0.125%/0.02EDTA来消化细胞,一般的我们消化2min就够了,然后适当吹打散就ok了,一般用含血清的胰酶就可以终止消化了。 其实,在用血清终止胰酶作用后,又经过培养体系扩大的稀释,即使胰酶少量存留,也应该影响不大。不过,就你的描述,我觉得消化时胰酶浓度还可以降的更低一些,可以试试0.125%。
粥辰辰辰辰
吸除原培养基,加入PBS洗一次,然后加入少量0.25%胰酶0.02%EDTA混合液(约200ul),37度消化2分钟,再拿出来镜下观察发现细胞已全部漂起来了,急忙加入完全培养基终止消化,轻轻吹打后分别传入已加入完全培养基2ml/孔的6孔板中。
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