求助:成年小鼠心肌细胞分离

成年小鼠心肌细胞则为终末分化细胞，不再具有分裂增殖能力。因此，小鼠出生时间越短，其心肌细胞分离后成活率越高，越容易贴壁生长。大量观测表明，选择1~3 d龄小鼠分离其心肌细胞进行原代培养较为理想.其中尤以半日龄小鼠心肌细胞培养效果最佳。

可以添加血清促进细胞贴壁，血清中有促贴壁因子

以下是一些常用的方法和技巧，可以帮助您提高心肌细胞的培养效果：

1. 酶消化时间和酶浓度：优化心肌细胞的酶消化时间和酶浓度可以帮助获得更好的细胞分离效果。尝试不同的酶消化时间和酶浓度，可以通过试错的方式找到最适合您的细胞类型和实验条件的条件。

2. 预培养时间：在将心肌细胞接种到培养皿之前，可以考虑进行一段时间的预培养。这有助于细胞附着并适应培养条件，提高贴壁效率。

3. 培养基配方：选择适合心肌细胞的培养基配方非常重要。心肌细胞通常需要特定的培养基成分和补充物，如特定的细胞因子、血清或血清替代物等。确保使用的培养基配方符合您的细胞类型的要求。

4. 表面涂层：尝试不同的细胞外基质（ECM）涂层材料可以提高心肌细胞的贴壁效果。常用的涂层包括胶原、明胶、层粘连蛋白等。不同的细胞类型可能对不同的涂层材料有偏好，因此可以进行试验以找到最适合您的细胞类型的涂层材料。

5. 培养条件：保持适宜的培养条件对心肌细胞的贴壁和生长非常重要。包括适当的温度、CO2浓度、培养皿涂层的湿度等。

1.有时由于买的是活力不好的的老鼠导致贴壁能力较差。

2、培养基的PH值

由于心肌细胞非常娇嫩，PH如果很碱的话就比较难贴壁。所以我们每次都是在取材之前才调培养基的PH值，这样避免ph值出现较大范围的波动（培养基配置一段时间后，如果hepes加的量不够，PH可能会变化较大）。

3、细胞接种密度

结果接种密度太大影响贴壁，密度太小，细胞之间不能形成有效得到联系（即分泌一些生长因子促进生长）

4、血清的问题

国产的血清就是性能不稳定，即批次之间的稳定性比较差

5、培养瓶的问题

如果细胞的状态不佳，不妨预先用多聚赖氨酸或者明胶处理一番，经费允许的话，用血清预处理过夜也行，感觉即使是用玻璃的培养瓶经过处理以后贴壁得能力也不错。

6、胰蛋白酶的问题

浓度与作用时间都是比较大的影响因素，用胰酶加胶原酶，即 0.125%胰酶+0.08%胶原酶等比混合后消化10分钟，一般10只老鼠用混合酶10ml第一次消化，后面根据剩余的组织量调整消化酶的体积，一般要求吹打后能将组织充分在消化酶中分散开，即传统所说的组织量的30-50倍。这种方法常消化2-3次就完全可以了。