同一种菌，同一块板，菌落形态发生改变！

肉眼看的话确实属于不同形态的菌，建议挑单菌落做16s pcr，与此同时，将单菌落进行三区画板，得到纯菌，根据测序结果再进行保菌和进一步分析；如果单菌落测16s测出来的是双向重叠峰的话，建议多次纯化，直到测序结果正常一致！祝实验顺利！

基因测序是金标准，别的手段都是辅助，直接做基因测序吧

如果你确定操作没有问题的话，那么就需要做基因测序。

如果在复苏甘油冻存菌液后，出现了以前未见的两种菌落，且多次实验中都出现了这种情况，即使使用全新的冻存菌液也无改善，那么进一步的分析和确认是很重要的。

菌落质谱（MALDI-TOF MS）可以用来鉴定菌落中的细菌种类，但有时在同一种菌的菌群中可能存在不同的菌株或变种，这可能导致它们在表型上的差异。基因测序是一种更加全面和准确的方法，可以提供菌株的遗传信息，有助于更准确地确定菌株的身份和进一步分析。

如果您在实验中遇到了类似情况，我建议您考虑进行基因测序分析以进一步确认和鉴定菌株。基因测序可以提供更详细的菌株信息，包括基因组序列和相关基因的功能预测，有助于解释菌株之间的表型差异。

还是做基因测序吧，不然不好区分