【免疫荧光二抗选择问题】

可以三染，但是驴抗羊的会和羊抗鼠/兔的反应，所以应先孵驴抗，然后洗掉孵羊抗，另外不能用羊血清封闭了，BSA应该可以

不建议三染，二抗和三抗之间会发生交叉反应。

在进行小鼠组织石蜡切片三色免疫荧光染色时，需要考虑到不同抗体之间的交叉反应问题。以下是一些建议：

在选择抗体时，最好选择不同种属的抗体，以减少交叉反应的可能性。例如，您可以选择兔抗小鼠、鼠抗兔、羊抗小鼠等抗体。

在进行染色之前，需要进行抗原修复和非特异性结合位点的阻断，以提高染色效果和减少背景信号。您提到的封闭液有山羊血清和BSA，可以根据您所使用的抗体和实验条件进行选择。

在选择二抗时，最好选择与一抗不同种属的二抗，以减少交叉反应的可能性。例如，您可以选择驴抗兔、兔抗羊等二抗。

对于驴抗羊的二抗，需要考虑与您使用的一抗之间的交叉反应问题。建议先进行单独的实验，检测驴抗羊二抗是否会与您的一抗产生交叉反应，以确定是否适合使用。如果交叉反应较强，可以考虑使用其他种属的二抗。

在进行染色时，可以先孵育一抗，洗掉后再孵育二抗，以减少二抗之间的交叉反应。

你的一抗二抗都有羊源的，封闭液也是山羊血清，这样很容易有非特异结合。建议二抗都选用驴源的二抗