细胞免疫荧光求助

细胞外的杂点影响不大的，可能是玻片不干净，不同视野的细胞染色深浅不同可能是不同细胞处于不同状态或代谢水平，所以一张片子要多挑几个视野

免疫荧光染色的背景杂乱点可能来自以下几个方面：

细胞自身的背景荧光：某些细胞在荧光显微镜下会表现出一定的自发荧光，这种荧光可能会干扰目标蛋白的检测，需要做好对照组的设置。

染色剂的非特异性结合：在染色过程中，染色剂有可能与细胞中其他非目标蛋白结合，形成非特异性荧光，这种情况下可以尝试更换染色剂，或者对反应过程进行优化，例如加入一些蛋白结合剂，减少染料的非特异性结合。

培养条件的不稳定性：细胞的生长环境对免疫荧光染色结果也有影响，例如温度、pH值等变化都可能导致背景荧光的变化，需要做好对照组，确保背景荧光的变化是由目标蛋白的表达变化所引起的。

至于同一张片子出现不同位置的细胞结果不一致的问题，这可能是由于细胞分布不均匀，不同细胞在药物作用下的反应不同，也有可能是操作技术上的误差，例如药物未混匀等，需要在实验操作过程中尽量保持操作一致性，并且对药物作用进行优化，如药物浓度、作用时间等，以减少影响实验结果的干扰因素。此外，也可以考虑增加样本数量和重复实验，以获得更加可靠的结果。

出现杂点可能是以下几个原因：

1、二抗未洗净（再使用PBS多洗几次）

2、孵育过程中出现了干燥现象，产生非特异性染色（注意湿盒的使用，避免干燥）

3、抗原封闭不彻底（使用二抗同源血清进行封闭，延长封闭时间等）

4、一抗特异性问题（换抗体，或者多抗换成单抗进行实验）

这个考虑是非特异性背景结合，建议封闭背景