线粒体自噬免疫荧光双染

可以将两种抗体混合一起孵育，但要注意两种抗体应该来自两个不同的种属，例如鼠、兔，同事还要注意可能不同的抗体稀释比例，二抗也要对应不同种属

可以两个抗体mix一起孵育，也可以先孵LC3一抗二抗，再孵tom20一抗二抗

在进行线粒体自噬的检测时，可以使用tomm20和LC3共定位来判断线粒体自噬的情况。对于一抗的孵育，需要选择两种不同物种的一抗，例如兔源抗体和小鼠源抗体，以避免交叉反应的干扰。在进行共孵育时，可以选择使用二抗（如荧光标记的抗兔或抗小鼠二抗）混合使用，也可以分别使用两个单独的荧光标记的二抗进行染色。不同的实验室和研究者可能会有不同的具体方法和方案，因此建议根据自己的实验需要进行优化和调整。

1．一步双染色法先将两种荧光标{己抗体按适当比例混合(A+B)，按直接法进行染色。2．二步双染色法先用TRITC标记的A抗体进行免疫荧光染色，再用FITC标记的B抗体染色，根据两种抗体的动物种属不同，可用直接法也可用间接法。应用中，常用的方法是免疫荧光组织化学中间接法和SABC-Cy3法相结合。进行双重染色时，由于两种一抗种属来源不同，可把一抗混合使用。