用蔗糖密度梯度法纯化线粒体

线粒体悬液
蔗糖溶液 Tris-HCl EDTA
Bockman SW28 号转头

1. 在用于 Bockman SW28 号转头（或与其等同的产品）的 Uitradear 离心管中，小心地在 15 ml 1.5 mol/L 的蔗糖溶液上加一层 15 ml 1.5 mol/L 的蔗糖溶液，形成 30 ml 的梯度：

1.0 mol/L 蔗糖和 1.5 mol/L 蔗糖溶液中含：

10 mmol/L Tris-HCl ( pH 7.5)

1 mmol/L EDTA，pH 7.5

2. 小心加入线粒体悬液（总体积 7 ml），60000 g（22000 r/min）离心 20 分钟。线粒体会在 1 mol/L 和 1.5 mol/L 界面处形成一薄层。

3. 移去样品层及其与 1.0 mol/L 层的交界。

4. 用一巴斯德吸管轻柔的在 1.5 mol/L 层顶部吸出线粒体。

5. 稀释蔗糖溶液，17000 g 离心 15 分钟沉淀线粒体。

6. 用 30 ml 缓冲液洗一次，重悬浮于合适体积的适于后续工作的缓冲液中。