求教 细胞免疫荧光染色顺序

我一般是先染一抗二抗，再染phalloidin,室温1h就行，最后dapi

建议按照以下步骤进行：

固定和渗透化细胞样品。

加入第一抗体（粘着斑蛋白抗体）并孵育。

用 PBS 冲洗样品，以去除未结合的第一抗体。

加入第二抗体（山羊抗兔 IgG 的荧光素标记物）并孵育。

用 PBS 冲洗样品，以去除未结合的第二抗体。

加入鬼笔环肽荧光素标记物，并孵育。

用 PBS 冲洗样品，以去除未结合的鬼笔环肽荧光素标记物。

加入 DAPI 核染料，孵育。

应该在敷完一抗后加鬼笔环肽再加二抗

鬼笔环肽染色可与抗体一起使用，可以添加在一抗或二抗孵育步骤时共染。