子若倾兮
求教细胞免疫荧光染色的顺序。
想染粘着斑蛋白和鬼笔环肽还有DAPI
请问应该在敷完一抗后加鬼笔环肽再加二抗,还是敷完一抗二抗再加鬼笔环肽呢
鬼笔环肽是罗丹明标记的,二抗是山羊抗兔488
感谢
balalaLy
我一般是先染一抗二抗,再染phalloidin,室温1h就行,最后dapi
loveliufudan
建议按照以下步骤进行:
固定和渗透化细胞样品。
加入第一抗体(粘着斑蛋白抗体)并孵育。
用 PBS 冲洗样品,以去除未结合的第一抗体。
加入第二抗体(山羊抗兔 IgG 的荧光素标记物)并孵育。
用 PBS 冲洗样品,以去除未结合的第二抗体。
加入鬼笔环肽荧光素标记物,并孵育。
用 PBS 冲洗样品,以去除未结合的鬼笔环肽荧光素标记物。
加入 DAPI 核染料,孵育。
毛利小五郎的徒弟
应该在敷完一抗后加鬼笔环肽再加二抗
sswei
鬼笔环肽染色可与抗体一起使用,可以添加在一抗或二抗孵育步骤时共染。
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