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细胞爬片免疫荧光有些问题请教下各位小可爱们。

相关实验:细胞免疫荧光

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梦中医学界扛把子

想要做细胞爬片的免疫荧光,有几个问题请教下:

1、通透后需要封闭,我看封闭有血清和5%BSA,这两个有什么区别吗,BSA浓度对不对

2、还是在帖子上看到的,一抗和二抗稀释是用1%BSA,这个浓度对吗,或者用其他的稀释?

3、荧光二抗不知道怎么选择,除种属外,我看很多都是用Alexa fluor 系列,这个系列除了荧光颜色不一样,还有其他区别吗?有推荐使用的其他二抗吗。

4、如果各位小可爱有积累的经验可以告诉我一下嘛

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4 个回答

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申东熙老伯

有帮助

血清和BSA都可以用来封闭,一抗稀释液的话,也可以用封闭液直接稀释。二抗的选择要根据一抗来确定,荧光素选实验室能拍出来的。

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毛利小五郎的徒弟

有帮助

血清效果好但是贵,一般可以用BSA代替,1%-5%的浓度。

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balalaLy

有帮助

封闭一般都是用山羊血清比较多,抗体稀释用山羊血清+pbst,荧光二抗我一直都是用 Alexa fluor 系列,看你使用的荧光显微镜能使用哪些波长的荧光。一般488,594是最常用的。

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NatureBios

有帮助

封闭和抗体稀释液按照你说的都是可以的,二抗是要看种属的,和一抗配合,至于荧光素的选择,这个要看我们实验室的荧光显微镜能识别哪些波长的光谱

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