细胞爬片免疫荧光有些问题请教下各位小可爱们。

梦中医学界扛把子

2022-11-11

想要做细胞爬片的免疫荧光，有几个问题请教下：

1、通透后需要封闭，我看封闭有血清和5%BSA，这两个有什么区别吗，BSA浓度对不对

2、还是在帖子上看到的，一抗和二抗稀释是用1%BSA，这个浓度对吗，或者用其他的稀释？

3、荧光二抗不知道怎么选择，除种属外，我看很多都是用Alexa fluor 系列，这个系列除了荧光颜色不一样，还有其他区别吗？有推荐使用的其他二抗吗。

4、如果各位小可爱有积累的经验可以告诉我一下嘛

申东熙老伯

2022-11-11

有帮助

血清和BSA都可以用来封闭，一抗稀释液的话，也可以用封闭液直接稀释。二抗的选择要根据一抗来确定，荧光素选实验室能拍出来的。

毛利小五郎的徒弟

2022-11-11

有帮助

血清效果好但是贵，一般可以用BSA代替，1%-5%的浓度。

balalaLy

2022-11-11

有帮助

封闭一般都是用山羊血清比较多，抗体稀释用山羊血清+pbst，荧光二抗我一直都是用 Alexa fluor 系列，看你使用的荧光显微镜能使用哪些波长的荧光。一般488，594是最常用的。

NatureBios

2022-11-11

有帮助

封闭和抗体稀释液按照你说的都是可以的，二抗是要看种属的，和一抗配合，至于荧光素的选择，这个要看我们实验室的荧光显微镜能识别哪些波长的光谱