毛利小五郎的徒弟
在培养细胞的时候最容易出现环境污染、细胞死亡、增长停止等情况;
避免方法:严格的规范操作
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一、在培养细胞的时候出现环境污染、细胞死亡、增长停止等情况;
二、自己准备的MEF细胞培养出的胚胎干细胞并不是很好尤其是在hES时长势很不好但是却找不到其中的原因。
需要注意如下问题:
1.细胞培养时要规范标准。
(1)严格控制无菌操作。
(2)培养环境需要每日观察。
(3)细胞培养基及相关试剂的选择。培养时会用到培养基、血清、试剂等物品但是选择的产品应该是出自正规厂家的优质产品,劣质的产品往往技术不过关其中包含很多有害物质因此不建议不够。
2.细胞扩增时间过长导致细胞老化、生长缓慢。通常MEF细胞培养到3-4代后,增长速度就会明显变慢,因此我们建议培养一段时间后应该用丝裂霉素进行处理、技术并冻存,在需要细胞时复苏后即可使用。
3.hES对培养层细胞的要求。
(1)品系要求不同。现在我们所用的细胞大多数是来自WiCell 的H1、H9等这些都适合CF-1小鼠的饲养层细胞。但是国内常用的今昔小鼠如果作为hES饲养层来说并不适合。
(2)hES饲养层的小鼠细胞应该采取不大于12.5天的小鼠胚胎。
(3)不能够无限扩增通常第二代就应该用丝裂霉素处理。
(4)在铺饲养层之间必须用基质胶来处理下培养板或培养皿。
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