细胞相关
新鲜芒果汁
你好，想问一下大家，抑制剂的用法。
我想用我的蛋白刺激细胞产生一些细胞因子，再用相关信号通路抑制剂抑制看一下相关细胞因子的变化(WB），是不是要提前将我的蛋白与抑制剂共孵育再加入到细胞内呢，还是先后加呢。
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1 个回答
Eason老歌迷
有帮助
我建议你提前将该蛋白与抑制剂共孵育再加入到细胞内，然后加完就进行实验。因为有时候细胞是受刺激完很短时间内会分泌你想要测的蛋白，然后很快就降解了。
新鲜芒果汁
谢谢你的回复，具体的孵育时间还有后续处理细胞的时间，是不是还需要做一些预实验，我看抑制剂通常加入细胞都是很短的处理时间大概在30分钟到三个小时，这个具体孵育时间可以是在30min到三个小时控制吗，感觉文献有些也说的不清楚，不知道怎么办，我的蛋白量又太少了。。。要不然可以多试一些条件。还有一个问题，就是我想用信号通路的激动剂(重组蛋白)刺激该蛋白从而影响下游表达，是不是也需要共孵育，还是要提前加激动剂。抱歉我的问题太多了，上没有师兄师姐，导师又撒手不管，难!
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