丁香实验_LOGO
登录
提问
提问
我要登录
|免费注册
丁香通

质粒浓度低

相关实验:纯化 DNA 实验

user-title

大儿子花猫

构建的以pCHO1.0为载体的质粒,测序正确,摇菌50ml,用天根去内毒提质粒,100ul洗脱,浓度只有100ng/ul左右。260/280/230都没有问题。求大神指导问题出在哪了,浓度一直上不去。

wx-share
分享

3 个回答

user-title

bamboopiggy

有帮助

你这50ml不会是在50ml管里,封死管口直接摇的吧?感觉是你菌量不够

user-title

天一湖医者

有帮助

 1、增加收菌次数,相对提高了质粒的量,这样的话裂解液的量可以适当增加;

  2、裂解要充分,变性和复性按说明应该是不超过5分钟,合理控制时间,一般在3分到4分半的时间都是可以的;

  3、过柱子时,吸附的时间尽量长一些,可以在这期间做做其他实验或者吃个饭什么的;

  4、如果没有必要,不使用去蛋白液,因为每过一遍柱子,其损耗越大,不过这得根据说明的菌种而定;

  4、最后洗脱回收的时候,要单方面提高浓度,就要适当减少洗脱液的量,我一般都是回收到40~50 μL的,同时要增加洗专脱次数,一般两三次足矣.

  如果以上方法都用遍了还无效,就应该考虑菌种本身的问题,是不是冻融或者传代次数过高,导致质粒本身丢失

user-title

Eason老歌迷

有帮助

质粒的浓度过低的话,可能有几个原因。首先你裂解要充分,变性和复性按说明应该是不超过5分钟,合理控制时间,一般在3分到4分半都行。然后你过柱子时,吸附的时间尽量长一些。

提问
扫一扫
丁香实验小程序二维码
实验小助手
丁香实验公众号二维码
关注公众号
反馈
TOP
打开小程序