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封闭时间不够或浓度不够都有可能 导致一些抗体非特异性吸附 另外在染色过程中需要保证湿润的环境 否则也会影响染色
小暮
可能原因一:表达目标蛋白的细胞过少,标本中使用更多的细胞,试用其他瞬时转染方法,或者使用稳定转染细胞系。
可能原因二:目标蛋白在细胞中没有表达。可制备细胞裂解液,用Western Blotting验证目标蛋白在细胞中是否表达
dxywode
1.组织切片太厚:这种情况下可以选择将组织切片变薄试试。
2.封闭不佳:封闭的目的就是为了减少非特异性的结合,减少背景染色。如果背景太强,可以考虑换种封闭液或者增加封闭孵育的时间。
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