Kkkkzzzk
有没有做过这个实验的兄弟姐妹@ 'ェ' @
从一些资料上看到过说平板画格稀释数到但是没看到文献有详细介绍,有没有protocol,如何操作和计算呀?
我没有师兄师姐,感觉每一步都好艰难
土井挞克树
菌落形成单位的计量方式与一般的计数方式不同,一般直接在显微镜下计算菌体数量会将活与死的菌体全部算入,但是CFU只计算活的菌体数量,也就是说能够在平板上生长出来的活的微生物才会形成CFU。理论上,分散均匀的情况下,一个活细胞形成1CFU。在实际操作中为了更好分散,很经常用到涡旋振荡器进行混匀,但容易出现死菌。
loveliufudan
确定细菌的最低可计数单位(Colony Forming Units,CFU)需要进行稀释系列和平板计数实验。这是一项基本的实验技术,以下是一般的操作步骤和计算方法:
1. 准备稀释液:选择适当的稀释液(例如,无菌生理盐水或缓冲液)来稀释细菌悬浮液。最常用的是进行10倍的稀释,以确保适当的计数范围。
2. 稀释样本:取一定体积的细菌悬浮液(通常是0.1 mL)加入到稀释液中,并进行充分混合。
3. 进行连续稀释:将上一步稀释后的样品取出一定体积(例如0.1 mL),加入到下一个稀释液管中,并进行充分混合。重复此过程,直到达到所需的稀释倍数。
4. 取平板:取一块含有适当培养基的平板。对于不同类型的细菌,可能需要选择特定的培养基。
5. 加样:将稀释后的样品取出一定体积(例如0.1 mL),均匀涂抹在平板上。
6. 培养:将平板在适当的温度和培养条件下孵育一段时间,通常是24-48小时。
7. 计数:在培养后的平板上观察和计数单个菌落。一般建议选择30-300个菌落来进行计数,以确保结果的准确性。
8. 计算:根据所使用的稀释倍数、加样体积和所计数的菌落数,可以计算出细菌悬浮液中的最低CFU。公式为:最低CFU = (所计数的菌落数)/(加样体积 × 稀释倍数)。
请注意,这只是一般的操作步骤,具体的实验条件和计算方法可能因所研究的细菌和实验目的而有所不同。
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