原理
芽胞具有高度的折光性，外膜致密，渗透性低，故普通染色法不易使其着色，芽胞染色法是根据芽胞既难以着色，而一旦着色又难以脱色的特点设计的，所有芽胞染色法都基于同一个原则：采用着色力强的染料，并加热以促进标本着色，然后使菌体脱色，而芽胞上的染料仍保留，经复染后，菌体和芽胞呈现不同的颜色。
材料与仪器
细菌样品
美兰 95%酒精 冰醋酸 结晶紫 黄叱精 奈瑟染液
显微镜
美兰 95%酒精 冰醋酸 结晶紫 黄叱精 奈瑟染液
显微镜
步骤
1、材料
(1)染液甲
第一液：美兰1g，95%酒精30ml，冰醋酸50ml，蒸馏水100ml。
第二液：结晶紫1g, 95%酒精10ml, 蒸馏水300ml。
以上第一液二份，与第二液一份混合之。
(2)染液乙，黄叱精1或2g，热蒸馏水300ml，待溶解后过滤。
2、染色法
(1)涂片按常规法固定后，滴加奈瑟染液甲液数滴于涂片上，15～30 Sec，水洗。
(2)用奈瑟染液乙液复染10～30秒钟。
(3)迅速用水洗，吸干、镜检。
3、结果
菌体呈鲜明黄色、异染颗粒呈深紫兰色。
注意事项
1. 涂片按照常规方法要固定好，防止脱落。
2. 使用显微镜时需要调节好物镜与目镜。
常见问题
制成涂片后，用两份溶液I和一份溶液I的混合液，染70秒钟，水洗.再染以溶液，再水洗，吸乾后镜检，菌休菊橙色，异染粒深蓝色。
来源：丁香实验
