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有做适配体连接细菌的友友吗?

相关实验:细菌奈瑟染色法

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却很坚强

为什么我之前连接的时候还能连上一点点,重新孵育了细菌就连不上了呀,尝试了好多次了,有友友过来交流一下吗?

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4 个回答

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dxy_kd3ees49

有帮助

我也在做这方面,试了很久还是连不上,您现在有解决方案了吗

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毛利小五郎的徒弟

有帮助

你可以加一些促连剂,可以起到类似催化剂的作用,促进连接。

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却很坚强user-title

我看镁离子会影响 但是调整了之后还是不大行 我用的是文献里面常用的那种

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huarenqiang5

有帮助

主要考虑如下原因:

1.同源臂设计太短了,不要少于28bp。

2.根据同源重组酶的说明书确定是否是Vector量太高了,调整连接比例。

3.再次确认需要连接的片段大小是否正常,有可能是一开始PCR的模板就有问题,建议模板测序。

4.根据酶的说明书,适当延长连接时间。

5.平板不长菌也可能是质粒毒性太高了,不利于大肠杆菌生长。降低培养温度,或者重新设计质粒降低毒性。

6.换用更好用的感受态细胞。

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Dr_劉医生

有帮助

取决于你是怎么测的适配体和细菌的结合实验呢?用流式测,就会出现找不到结合细菌数的问题,可以试试用荧光法来侧适配体的浓度。

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却很坚强user-title

我用的共聚焦直接观察的 亮的细菌不多呢?

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