求助 分枝杆菌培养相关问题-2

实验—— 用减毒株感染细胞

我的操作：

如BCG感染巨噬细胞，MOI做了3个条件（10、5、1），感染4h后弃掉菌，PBS润洗两遍（洗掉细胞外的菌），换液后继续培养（从此时算感染的0时），这之后每隔12h半换液…

观察结果:

前36h细胞状态良好，镜下仔细看能看到不活跃的菌（会动，但没那么活跃）。

于是我又放了24h，也就是到了60h时再去看，发现菌大爆发，细胞被吃。

问题：

1. 在吃细胞的是BCG吗？有没有一种可能是：我的BCG培养过程中有杂菌存在，或者我感染的时候不小心有其他的菌掉进去？ 然后杂菌的传代速度更快，所以60h看到的是具有生长优势的杂菌，而不是BCG？

提这个问题的原因是 我给我导看了镜下菌吃细胞的视频，他说看起来太活跃了，不像是分枝杆菌，像是别的杆菌…怀疑是染杂菌。

那请问有没有什么方法，或者有没有什么特殊的培养基可以去除结核分枝杆菌培养过程中的杂菌？

2. 我细胞培养基中用的抗性是氨苄青霉素，但是我不知道它很容易失活，所以我是一次配了50毫升左右的培养基，每次换液用的都是同一管培养基，没有现用现配。

有可能36h-60h之间菌爆发是因为抗性失活所以杂菌起来了吗？

还有氨苄会影响BCG或H37Ra吗？前36h平安无事 是因为抗性抑制了菌的活性吗？我之前以为只有链霉素会影响…

如果氨苄会抑制的话，想请教一下各位老师们应该用什么抗性呢（我看到有文章没有加抗性，我也有做过一批没有加抗性的，结果12-24h 细胞就全部被吃掉了）

3.订了抗酸染色试剂，下周才会到…还订了牛分枝杆菌PCR试剂盒，想问下如果在菌和细胞稳定状态的时候（我们认为菌感染成功细胞时）裂解细胞去提RNA或DNA，PCR会不会因为菌太少而P不出来啊…