【求助】慢病毒相关问题

最近一直在做慢病毒载体，用的是第二代的三质粒系统，目的片段是一个肝细胞的转录因子。载体构建好之后，包装了一批病毒。然后拿慢病毒感染肝癌细胞株3B和Huh7细胞，想通过PCR和Western验证病毒的表达情况。出现了一些问题：

1、每次拿慢病毒感染肝癌细胞株，荧光都很亮，但是做PCR或者Western之后，加对照病毒GFP组的细胞和目的病毒无差异。（条带都较亮）尤其是Western，几乎没有差异。

2、感染细胞之后，细胞浆荧光很亮，胞核明显暗淡，因为我做的是一个转录因子的慢病毒载体，应该在细胞核富集。

3、慢病毒是整合型病毒，除了目的基因之外，GFP是不是也插入到细胞的基因组，另外这种整合是随机的还是有靶向的插入？

因为之前做腺病毒的时候，目的基因上调可达上百倍，这回第一次用慢病毒，情况不是很了解，希望有经验的老师给予解释！

1，考虑到LZ的病毒能够感染肝癌细胞株并且滴度还可以，目的条带都很亮，可能是肝细胞的该转录因子在肝癌细胞株本身表达量就很高，由于本底就很高，所以感染后不能明显看出差异，建议感染另外一种细胞系试试。

2，转录因子似乎也不是都在细胞核富集吧？可能有个转位的过程。

3，如果是GFP融合蛋白的应该也是可以整合的，至于是随机还是靶向的，本人也不清楚，呼唤高手！

多谢！

我确实也考虑了本底的问题，换了另外一个细胞株，普通PCR做出来就是只有加了病毒的才跑出来条带，那就是“有和无”的关系了，但是Western做出来，确不是这个样子，每组都有条带，而且看不出趋势，十分无解！！！

这种整合是随机的 ，病毒整合需要时间，所以荧光荧光是先亮然后变暗，整合上去之后再变亮的